荧光比分析（荧光怎么才能出来比率型）

本文目录一览：

• 1、荧光分析法为什么比紫外-可见分光光度法有更高的灵敏度?
• 2、仪器分析——荧光分析法
• 3、荧光分析法的特点
• 4、为什么荧光分析法比紫外可见法具有更高的灵敏度和选择性
• 5、与紫外吸收法相比,荧光法的优点
• 6、荧光定量分析方法主要有

荧光分析法为什么比紫外-可见分光光度法有更高的灵敏度?

荧光检测器与入射光成直角，基本不受入射光影响，所以灵敏度提高了。

因为荧光或磷光分析法是在入射光的直角方向测定荧光强度，即在黑背景下进行检测，因此可以通过入射光强度，或者增大荧光或者磷光信号的放大倍数来提高灵敏度。

如果增大检测器的放大倍数，检测到的人射光强度和透射光强度也同时增大，同样不能提高其比值，也就不能达到提高灵敏度的目的。所以，荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高，般要高2~3个数量级。

它的最低检出限在质量分数为10-6~10-9数量级之间，对荧光效率高的物质甚至可以达到质量分数为10-11数量级。荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法灵敏度高2~4个数量级。

试解释分子荧光分析法的灵敏度为什么比紫光―可见吸 分子荧光仪的光源与检测器呈直角，所以检测信号相当于在暗背景上进行检测，灵敏度对比紫外高。

仪器分析——荧光分析法

1、因荧光分析法中的浓度与读数的线性较窄，故（RX－RXb）/（Rr－Rrb）应为0.50～0；如有超过，应在调节溶液浓度后再测。偏离线性时应改用工作曲线法。

2、原子荧光光谱法是1964年以后发展起来的分析方法。原子荧光光谱法是以原子在辐射能激发下发射的荧光强度进行定量分析的发射光谱分析法。但所用仪器与原子吸收光谱法相近。

3、荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态，激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光，可以进行定性或定量分析的方法。

4、原理不同：（1）紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。（2）荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定。

荧光分析法的特点

1、灵敏度高：荧光分析的最大特点是灵敏度高，通常情况下要比分光光度计的灵敏度高出2-3个数量级。选择性强：包括激发光谱和发射光谱，在鉴定物质时，通过选择波长可以使分子荧光分析有多种选择。试样量少和方法简便。

2、荧光分析法的最大特点是灵敏度高，对某些物质的微量分析可以检测到10克数量级，如污水中的银含量用荧光分析法可以检测到10克，汞可以检测到10克。

3、如果该物质的浓度不同，它所发射的荧光强度就不同，测量物质的荧光强度可对其进行定量测定。荧光分析法的特点是灵敏度高、选择性好、样品用量少和操作简便。

4、比起质谱仪、极谱仪和电子探针仪来它在造价上要便宜很多倍，而且荧光分析的最大特点是：分析灵敏度高、选择性强和使用简便。同时具备这三大特点的仪器并不多 。

为什么荧光分析法比紫外可见法具有更高的灵敏度和选择性

紫外吸收的入射光与检测器是在一条直线上的，检测器会受到入射光的干扰。荧光检测器与入射光成直角，基本不受入射光影响，所以灵敏度提高了。

试解释分子荧光分析法的灵敏度为什么比紫光―可见吸 分子荧光仪的光源与检测器呈直角，所以检测信号相当于在暗背景上进行检测，灵敏度对比紫外高。

如果增大检测器的放大倍数，检测到的人射光强度和透射光强度也同时增大，同样不能提高其比值，也就不能达到提高灵敏度的目的。所以，荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高，般要高2~3个数量级。

它的最低检出限在质量分数为10-6~10-9数量级之间，对荧光效率高的物质甚至可以达到质量分数为10-11数量级。荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法灵敏度高2~4个数量级。

因此，与只能得到待测物质的特征吸收光谱的分光光度法相比，在鉴定物质时，荧光法选择性更强。样品用量少及方法简便 由于灵敏度高，所以可大大减少样品用量。特别在使用微量样品时，效果明显。

荧光光度法：测量物质的荧光强度可对其进行定量测定。荧光分析法的特点是灵敏度高、选择性好、样品用量少和操作简便。

与紫外吸收法相比,荧光法的优点

因为荧光或磷光分析法是在入射光的直角方向测定荧光强度，即在黑背景下进行检测，因此可以通过入射光强度，或者增大荧光或者磷光信号的放大倍数来提高灵敏度。

灵敏度高：荧光分析法是一种基于分子荧光效应的检测方法，其灵敏度远高于传统的吸收光度法。荧光分析法通过测量荧光强度和激发光强度之间的比例关系，可以实现对被测物质的定量分析。

优缺点：（1）紫外分光光度计高自动化程度，维护方便、操作简便、效率高。（2）荧光分光光度法具有检测灵敏度高、专属性较强和使用简便等特点，常用于微量甚至痕量毒物的定量分析。

荧光定量分析方法主要有

1、根据式（2），可以采用标准曲线法，增量法，内标法等进行定量分析。但是这些方法都要使标准样品的组成与试样的组成尽可能相同或相似，否则试样的基体效应或共存元素的影响，会给测定结果造成很大的偏差。

2、间接测定方法有以下几种：化学转化法：通过化学反应将非荧光物质变为适合于测定的荧光物质。例如金属与螯合剂反应生成具有荧光的螯合物。有机化合物可通过光化学反应、氧化还原、偶联、缩合反等应，使它们转化为荧光物质。

3、实时荧光定量 PCR ，简称 RT-QPCR， 属于 Q-PCR 的一种，目前该技术已得到广泛应用，如：扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、 SNP 分析等。荧光定量 PCR 常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法。

4、当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。

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